Kako določiti optimalno koncentracijo?
Za induktor IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozid) velja, da višja kot je koncentracija, bolje je.Optimalna koncentracija je odvisna od specifičnih eksperimentalnih pogojev in želenega indukcijskega učinka.
Na splošno se koncentracija IPTG uporablja v območju 0,1-1 mM.Nižje koncentracije lahko zmanjšajo škodljive učinke na rast celic in lahko zmanjšajo citotoksičnost zaradi prekomerne ekspresije ciljnih proteinov.Višje koncentracije lahko povzročijo čezmerno presnovno obremenitev celic, kar vpliva na celično rast in učinkovitost izražanja.
Način za določitev optimalne koncentracije je lahko ovrednotenje stopnje izražanja ciljnega proteina z izvajanjem indukcijskih testov IPTG pri različnih koncentracijah.Preskuse kulture v majhnem obsegu je mogoče izvesti z uporabo razpona koncentracij IPTG (npr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM itd.), učinek izražanja pri različnih koncentracijah pa je mogoče ovrednotiti z zaznavanjem ravni izražanja ciljnega proteina (npr. Western blot ali fluorescenčna detekcija).Glede na eksperimentalne rezultate je bila koncentracija z najboljšim ekspresijskim učinkom izbrana kot optimalna koncentracija.
Poleg tega se lahko obrnete tudi na ustrezno literaturo ali izkušnje drugih laboratorijev, da razumete pogosto uporabljeno območje koncentracije IPTG v podobnih eksperimentalnih pogojih ter nato optimizirate in prilagodite glede na eksperimentalne potrebe.
Pomembno je omeniti, da se optimalna koncentracija lahko razlikuje glede na različne ekspresijske sisteme, ciljne beljakovine in eksperimentalne pogoje, zato je najbolje, da optimizirate za vsak primer posebej.
Čas objave: 28. septembra 2023