4-nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Učinek: ONPG je substrat, ki se posebej uporablja za odkrivanje prisotnosti in aktivnosti encima β-galaktozidaze.Ko je encim β-galaktozidaza prisoten in aktiven, cepi ONPG na dva produkta: o-nitrofenol in derivat galaktoze.Sprostitev o-nitrofenola povzroči spremembo rumene barve, ki jo je mogoče izmeriti s spektrofotometrom.

Uporaba: ONPG ima več aplikacij v raziskavah molekularne biologije in biokemije:

Določanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se običajno uporablja za merjenje in količinsko opredelitev aktivnosti encima β-galaktozidaze.Hitrost tvorbe o-nitrofenola, ki je neposredno sorazmerna z aktivnostjo encima, lahko izmerimo spektrofotometrično.

Genska ekspresija in regulacija: ONPG se pogosto uporablja v poskusih, povezanih z gensko ekspresijo in regulacijskimi študijami.Pogosto se uporablja v testih fuzijskega proteina, kot je pogosto uporabljen fuzijski sistem lacZ, za preučevanje izražanja genov pod nadzorom specifičnih promotorjev.Aktivnost beta-galaktozidaze, izmerjena z ONPG, omogoča vpogled v raven izražanja genov.

Preverjanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se lahko uporablja kot kolorimetrična presejalna metoda v tehnologiji rekombinantne DNK za ugotavljanje prisotnosti in delovanja gena LacZ, ki kodira β-galaktozidazo.Ta presejalna metoda pomaga pri prepoznavanju klonov, ki vsebujejo gen, ki nas zanima.

Študije kinetike encimov: ONPG je uporaben tudi pri preučevanju kinetike encima β-galaktozidaze.Z merjenjem hitrosti reakcije encim-substrat pri različnih koncentracijah substrata je mogoče določiti kinetične parametre, kot so Michaelis-Mentenove konstante (Km) in največje reakcijske hitrosti (Vmax).