4-nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS: 200422-18-0

Učinek: ONPG je substrat, ki se posebej uporablja za zaznavanje prisotnosti in aktivnosti encima β-galaktozidaze. Ko je encim β-galaktozidaza prisoten in aktiven, cepi ONPG na dva produkta: o-nitrofenol in derivat galaktoze. Sproščanje o-nitrofenola povzroči rumeno spremembo barve, ki jo je mogoče izmeriti s spektrofotometrom.

Uporaba: ONPG ima več uporab v molekularni biologiji in biokemiji:

Določanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se pogosto uporablja za merjenje in kvantificiranje aktivnosti encima β-galaktozidaze. Hitrost tvorbe o-nitrofenola, ki je neposredno sorazmerna z aktivnostjo encima, se lahko izmeri spektrofotometrično.

Ekspresija in regulacija genov: ONPG se pogosto uporablja v poskusih, povezanih s študijami ekspresije in regulacije genov. Pogosto se uporablja v testih fuzijskih proteinov, kot je pogosto uporabljen fuzijski sistem lacZ, za preučevanje ekspresije genov pod nadzorom specifičnih promotorjev. Aktivnost beta-galaktozidaze, izmerjena z uporabo ONPG, omogoča vpogled v raven ekspresije genov.

Presejanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se lahko uporablja kot kolorimetrična presejalna metoda v tehnologiji rekombinantne DNK za identifikacijo prisotnosti in funkcionalnosti gena LacZ, ki kodira β-galaktozidazo. Ta presejalna metoda pomaga pri identifikaciji klonov, ki vsebujejo gen, ki nas zanima.

Študije encimske kinetike: ONPG je uporaben tudi pri preučevanju kinetike encima β-galaktozidaze. Z merjenjem hitrosti reakcije encim-substrat pri različnih koncentracijah substrata je mogoče določiti kinetične parametre, kot so Michaelis-Mentenove konstante (Km) in največje hitrosti reakcije (Vmax).